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1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆疫霉菌致病性測定過程的致病性測定、結(jié)果計算、測定材料滅活處理的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆疫霉菌致病性的測定。

2 術(shù)語與定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

2.1 人工接種 Artifical inoculation

用人工培養(yǎng)的病原物，在人工控制的條件下，接種大豆植株誘發(fā)病害，根據(jù)大豆植株的發(fā)病程度判斷病原菌的致病性強(qiáng)弱。

2.2 接種體 Inoculant

用于人工接種致病性鑒定用的大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)卵孢子懸浮液。

2.3 下胚軸傷口接種 Hypocotyls inoculation technique

供試品種生長至2葉~3葉真葉時，用帶7號針頭的接種用注射器(2mL)，以針尖在大豆苗子葉下莖0.5cm處向下劃1cm長的傷口，將接種體0.5mL噴于傷口處。

2.4 對照品種 Contrast cultivar

在致病性測定時選定的感病品種 Williams和當(dāng)?shù)刂髟云贩N。

3 致病性測定方法

3.1 育苗

用于致病性測定的供試大豆品種(品系)和對照品種分別播于以新蛭石為基質(zhì)的大小適宜的容器中，株距(1~2)×(1~2)cm，育苗期溫度控制在20℃~30℃。每處理應(yīng)不少于15株，設(shè)置3個重復(fù)。

3.2 接種體制備

將供試菌株的菌絲塊移至胡蘿卜培養(yǎng)基(參見附錄A)上，25℃~28℃恒溫下黑暗培養(yǎng)8d~10d，刮取培養(yǎng)基表面的培養(yǎng)物，用組織搗碎杋配以適量無菌水將培養(yǎng)物搗碎成勻漿。在光學(xué)顯微鏡下觀察培養(yǎng)物勻漿中大豆疫霉菌卵孢子的數(shù)量，用血球計數(shù)板將孢子懸浮液的終濃度調(diào)配至每毫升約含2×10的4次方個孢子。接種體應(yīng)在使用當(dāng)天制備。

3.3 接種時間

測定的大豆苗長至2葉~3葉真葉期。

3.4 接種方法

采用下胚軸接種方法。

3.5 接種后管理

接種后的大豆苗在20℃~25℃、相對濕度90%以上保濕48h，轉(zhuǎn)入20℃~30℃的溫室培養(yǎng)，保持土壤含水量70%~80%。

3.6 調(diào)查部位

大豆苗下胚軸。

3.7 調(diào)查時間

接種4d后，當(dāng)感病對照品種的株發(fā)病率75%以上、發(fā)病程度達(dá)到7級(參見附錄B)以上方可進(jìn)行病情調(diào)査。每隔1d調(diào)査一次病情，至少連續(xù)調(diào)査5次。

3.8 病情調(diào)查與記載

按調(diào)査標(biāo)準(zhǔn)(參見附錄B)逐株調(diào)査，記載病級。

4 病情指數(shù)計算

將供試大豆品種的病情指數(shù)按計算公式(1)計算。

病情指數(shù)=∑病級株數(shù)×相應(yīng)病級代表值×100/(調(diào)查總株數(shù)×*高病級代表值) (1)

5 測定材料的滅活處理

5.1 剩余接種體帶回實(shí)驗(yàn)室經(jīng)滅菌處理。

5.2 將致病性測定后的大豆病株集中焚燒處理。

5.3 用于栽培大豆苗的基質(zhì)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行160℃干熱滅菌處理。

5.4 用于栽培大豆苗的盆缽帶回實(shí)驗(yàn)室，80℃水浴處理2h以上。

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